EJEMPLO DE TÉCNICAS DE EDICIÓN GENÓMICA EN MALFORMACIONES CARDIOVASCULARES

Mediante la técnica de edición genómica CRISPR-Cas9 se logró corregir una mutación focalizada en el gen MYBPC3 de un embrión. Este gen está relacionado con miocardiopatía hipertrófica, y la corrección se realizó en el alelo paterno mutante, utilizando el gen materno de tipo salvaje homólogo (células germinales e in vitro), logrando que los embriones presenten el gen materno y evitando el mosaicismo. También mediante CRISPR-Cas9 se logró crear un modelo de inactivación de CCM3 en células endoteliales cavernosas, dando lugar a cambios en la morfología mecánica y celular, contribuyendo a nuevos descubrimientos endoteliales.

LINK BIBLIOGRÁFICO:

1. https://www.nature.com/articles/nature23305
2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30549232

EJEMPLO DE TERAPIA CON STEM CELLS PARA TRATAR MALFORMACIONES CARDIOVASCULARES

Para poder tratar enfermedades cardiovasculares se ha usado la terapia con stem cells, las principales células empleadas son: BMMC (de fácil acceso mediante aspiración medular), MSC (presentan diferentes capacidades de diferenciación, morfológicas y de expresión génica, además tienen muy baja inmunogenicidad), CSC (demostraron que el corazón es capaz de auto-renovarse). Gracias a estos grupos celulares, se ha logrado identificar una "fuente de células progenitoras miocárdicas bien intencionadas", derivadas del epicardio, que pueden ser inducidas con timosina b4 para diferenciarse en miocardiocitos. 

Link Bibliográfico:

1. https://www.redalyc.org/html/4797/479748557014/
2. https://scielo.conicyt.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034-98872014000800011

EJEMPLO DE TRANSGÉNICO ANIMAL: MODELO MURINO EN MALFORMACIONES CARDIOVASCULARES

             

Se creó un modelo murino que reproduce las características de la hipertensión arterial pulmonar (hipoxia e inhibición de VEGF). Este ratón transgénico (HPX + SU) se utilizó en estudios metabolómicos para evaluar la reprogramación metabólica asociada con HAP en tejidos de pulmón y corazón, gracias al cual se descubrió: a) una activación normóxica de HIF-1α que produce una disminución de glucosa pulmonar y aumento de lactato y alanina, y b) alteraciones del metabolismo de los lípidos (disminución de ácidos grasos libres por regulación positiva de la β-oxidación).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS TRANSGÉNICOS:

VENTAJAS:

1. Posibilidad de crear nuevos y distintos modelos experimentales.
2. Creación de organismos productores de proteínas que simulan enfermedades humanas.
3. Creación de organismos transgénicos útiles para determinar la función correcta de los productos genéticos específicos.
4. Desarrollo de cultivos en áreas desérticas o estériles o incremento del tamaño de los frutos.
5. Se obtiene acceso a información directa, cambio de controles y variaciones y utilización de técnicas precisas en los modelos transgénicos.

DESVENTAJAS:

1. Los modelos transgénicos tienen mecanismos fisiopatológicos diferentes.
2. Los modelos "in vitro" difieren completamente de los modelos "in vivo".
3. Pueden producirse variaciones (mutaciones) en los modelos, debido a las técnicas empleadas.
4. Consecuencias en el equilibrio ecológico.
5. Debido a la modificación genética de virus, pueden producirse nuevas enfermedades o modificaciones de las existentes.

LINK BIBLIOGRÁFICO:

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6104186/
2. http://www.revespcardiol.org/es/modelos-animales-enfermedad-cardiovascular/articulo/13131362/
3. http://www.agroparlamento.com/agroparlamento/notas.asp?n=0802

EJEMPLOS DE ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA Y EN MALFORMACIONES DE LAS GRANDES ARTERIAS

• ADN-recombinante en la naturaleza: 

La "enzima recombinasa específica del sitio de tirosina" permite la transferencia del grupo fosfato, logrando el intercambio de ADN entre sitios diana específicos, mediante la escisión de la hebra de ADN por transesterificación de las topoisomeras del tipo IB.

• ADN-recombinante artificial:

Fracción de un hidrolizado de lactoferrina: comprende una serie de péptidos derivados de lactoferrina B (LF), que inhiben la vasoconstricción inducida por la angiotensina II, mediante el bloqueo de los receptores AT1 de angiotensina que contribuye junto con la inhibición del ECA.

 
LINK BIBLIOGRÁFICO:

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4381057/
2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6187709/
3. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Lactoferrin+hydrolysate+fracnon+with+a+low+molecular+weight+for+treating+hypertension

EXPRESIÓN DIFERENCIAL DE FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN: TBX5 y NKX2-5 POR MICROARRAY

La técnica de MICROARRAY se utilizó para determinar la expresión diferencial de los factores de transcripción de los genes: TBX5 (T-box) y NKX2.5. Se logró identificar que la interacción de estos genes está relacionada con los defectos cardiovasculares congénitos, donde una interacción cooperativa provoca una restricción combinatoria que da como resultado que el corazón embrionario se forme más allá de su diferenciación inicial.

LINK BIBLIOGRÁFICO:

1. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0092867416000052

PRUEBA DE PCR EN MALFORMACIONES DE LAS GRANDES ARTERIAS

T.: Mutaciones de los genes NKX2.5 y GATA4 en el desarrollo de cardiopatías congénitas.

O.: Investigar mutaciones de los genes NKX2.5 y GATA4 a través de secuenciación de ADN y PCR en tiempo real (RT-PCR).

M.: sangre venosa (de 385 pacientes sanos y que padecen alguna enfermedad cardíaca) y tejido del miocardio (de 27 pacientes sometidos a cirugía cardíaca).

A.N.: ADN-genómico de los genes: NKX2.5 y GATA4.

EXTRACCIÓN DEL ADN: se usó el kit de extracción de ADN-genómico de sangre (Empresa biomercado Box Shanghai)

 * L.: Se extrajo 5ml de sangre venosa, se añadió EDTA y se almacenó a -70°C. 

 * S.: ADN genómico 2l, 10xtampón de reacción (MgCl2 25 mmol/L) 5l, dNTP (2,5 mmol/L) 3 μl, cebador (100Mol/L) l para cada uno, enzima Taq 3l, y ddH2O 35l.

 * P.: Mediante espectrofotómetro ultravioleta.

G.:       NKX2.5             pb              

• Exón 1F/1R          565                        
• Exón 2-1F/1R       469                       
• Exón 2-2F/2-2R    442                             

           GATA4               pb

• Exón  1F/1R         779
• Exón 2F/2R          385
• Exón 3F/3R          413
• Exón 4F/4R          504       
• Exón 5F/5R          382
• Exón 6F/6R          457

PCR.: RT-PCR

                  Gen NKX2.5
          Temp. (°C)    Tiempo     Ciclos
P.D.:         95            5 min.       35
D.:            95           45 seg.       35
H.:        53-64          45 seg.       35
E.:            72           45 seg.       35
E.F.:         72           10 min.       35 
                   Gen GATA4
          Temp. (°C)    Tiempo     Ciclos
P.D.:         95            5 min.       35
D.:            95           45 seg.       35
H.:        51-59          45 seg.       35
E.:            72           45 seg.       35
E.F.:         72           10 min.       35 

V.: EFO en gel de agarosa.

LINK BIBLIOGRÁFICO:

1. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378111916303572?via%3Dihub

PRUEBAS DE TAMIZAJE Y CONFIRMATORIA EN LAS MALFORMACIONES DE LAS GRANDES ARTERIAS

PRUEBAS DE TAMIZAJE

Son pruebas que, en el recién nacido o en el feto, permiten detectar enfermedades como: atresia pulmonar, tetralogía de Fallot, transposición de las grandes arterias, entre otras. Estas pruebas son: Oximetría de pulso (se coloca un oxímetro de pulso en la mano derecha y en los pies; permite medir de forma indirecta la saturación de oxígeno en la sangre, se realiza en las primeras 24 horas de vida), y la Ecocardiografía básica ampliada (se realiza la exploración del corazón por la propuesta de Yagel: evaluación del abdomen fetal, de 4 cámaras, salida de grandes vasos y corte a nivel torácico 3 vasos; se realiza entre las semanas 18 y 22).

PRUEBAS CONFIRMATORIAS

Permiten la confirmación de la enfermedad, las pruebas principales son: Ultrasonido y Ecografía DOPPLER (permite evaluar la presencia o ausencia de flujo sanguíneo y sus características hemodinámicas y aportar con información morfológica de las estructuras vasculares, como: calcificaciones de la pared arterial, placas de ateroma, ulceraciones, trombos en la luz arterial), y Angiotomografía computarizada y Autorresonancia (permiten una adecuada caracterización de las arterias periféricas y el diagnóstico de estenosis u oclusión vascular).

Link Bibliográfico:

1. http://www.analesdepediatria.org/es-cribado-prenatal-cardiopatias-congenitas-poblacion-articulo-S1695403313004438
2. http://www.msal.gob.ar/images/stories/bes/graficos/0000000726cnt-deteccion-cardiopatias.pdf
3. http://www.redalyc.org/jatsRepo/3555/355553288008/html/index.html