T.: Mutaciones de los genes NKX2.5 y GATA4 en el desarrollo de cardiopatías congénitas.
O.: Investigar mutaciones de los genes NKX2.5 y GATA4 a través de secuenciación de ADN y PCR en tiempo real (RT-PCR).
M.: sangre venosa (de 385 pacientes sanos y que padecen alguna enfermedad cardíaca) y tejido del miocardio (de 27 pacientes sometidos a cirugía cardíaca).
A.N.: ADN-genómico de los genes: NKX2.5 y GATA4.
EXTRACCIÓN DEL ADN: se usó el kit de extracción de ADN-genómico de sangre (Empresa biomercado Box Shanghai)
* L.: Se extrajo 5ml de sangre venosa, se añadió EDTA y se almacenó a -70°C.
* S.: ADN genómico 2l, 10xtampón de reacción (MgCl2 25 mmol/L) 5l, dNTP (2,5 mmol/L) 3 μl, cebador (100Mol/L) l para cada uno, enzima Taq 3l, y ddH2O 35l.
* P.: Mediante espectrofotómetro ultravioleta.
G.: NKX2.5 pb
- Exón 1F/1R 565
- Exón 2-1F/1R 469
- Exón 2-2F/2-2R 442
GATA4 pb
- Exón 1F/1R 779
- Exón 2F/2R 385
- Exón 3F/3R 413
- Exón 4F/4R 504
- Exón 5F/5R 382
- Exón 6F/6R 457
PCR.: RT-PCR
Gen NKX2.5
Temp. (°C) Tiempo Ciclos
P.D.: 95 5 min. 35
D.: 95 45 seg. 35
H.: 53-64 45 seg. 35
E.: 72 45 seg. 35
E.F.: 72 10 min. 35
Gen GATA4
Temp. (°C) Tiempo Ciclos
P.D.: 95 5 min. 35
D.: 95 45 seg. 35
H.: 51-59 45 seg. 35
E.: 72 45 seg. 35
E.F.: 72 10 min. 35
V.: EFO en gel de agarosa.
LINK BIBLIOGRÁFICO:
- https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378111916303572?via%3Dihub
